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關于ELISA方法如何檢測帶抗體的相關指標
發布時間:2023-07-10   點擊次數:135次

在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結果可用目測或用分光光度計定量測定。


操作步驟:

1. 將抗原按5μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100μl /孔,4℃過夜。

2. 次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

3. 加2%BSA封閉室溫1h,200μl /孔。

4. 陽性對照從10ug/ml,做倍必稀釋,待測血清從1:50做倍比稀釋,預試驗后確定稀釋倍數及陽性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做標準曲線為參數),室溫1h。

5. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

6. 加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度)PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,100μl /孔,室溫1h。

7. PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

8. 顯色,100μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數,可用ABTS,OPD,TMB等。

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